| 貨號 | 產(chǎn)品名稱 | 規(guī)格 | 價格 | | D2400-50 | DNA病毒基因組提取試劑盒 | 50T | 400.00 | | D2400-100 | DNA病毒基因組提取試劑盒 | 100T | 700.00 |
DNA病毒基因組提取試劑盒
本試劑盒適合于從血清、細(xì)胞上清、淋巴液中提取DNA病毒基因組，不適合于RNA病毒基因組的提取。使用本試劑盒提取的基因組DNA可用于各種常規(guī)操作，包括酶切、PCR、文庫構(gòu)建、Southern雜交等實(shí)驗。操作步驟： 使用前請先在漂洗液中加入無水乙醇，加入體積請參照瓶上的標(biāo)簽。所有離心步驟均為使用臺式離心機(jī)在室溫下離心。1、取病毒上清液0.5ml，12000rpm離心5min，盡量吸盡上清使用，棄去沉淀。2、向病毒上清中加入20ul 10mg/ml的蛋白酶K，充分混勻，65℃消化10-20min，期間可顛倒離心管混勻數(shù)次。3、向管中加入500ul結(jié)合液，充分混勻。再向管中加入400ul無水乙醇，充分混勻，此時可能會出現(xiàn)絮狀沉淀，不影響DNA的提取，可將溶液和絮狀沉淀都加入吸附柱中，靜置2min。（吸附柱的大容積為750ul，可分兩次加入。一次吸附完離心后再將余下的混合液體加入柱中靜置離心。） 4、 12000rpm離心2min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。5、向吸附柱中加入700ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇)，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。6、向吸附柱中加入500ul漂洗液，12000rpm離心1min，棄廢液，將吸附柱放入收集管中。7、 12000rpm離心2min，將吸附柱置于室溫或50℃溫箱放置數(shù)分鐘，目的是將吸附柱中殘余的漂洗液去除， 否則漂洗液中的乙醇會影響后續(xù)的實(shí)驗如酶切、PCR等。8、將吸附柱放入一個干凈的離心管中，向吸附膜*懸空滴加50ul-100ul經(jīng)65℃水浴預(yù)熱的洗脫液，室溫放置5min，12000rpm離心1min。9、離心所得洗脫液再加入吸附柱中，室溫放置2min，12000rpm離心2min，即可得到高質(zhì)量的病毒基因組DNA。注意事項:
1、試劑盒拆封后，蛋白酶K需放置-20℃保存。
2、樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融，否則會導(dǎo)致提取的DNA段較小且提取量也下降。
3、若結(jié)合液中有沉淀，可在37℃水浴中重新溶解再使用，不影響效果。
4、洗脫緩沖液的體積好不少于50ul，體積過小會影響回收效率。洗脫液的pH值對洗脫效率也有影響，若需要用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在8.0左右(可用NaOH將水的pH值調(diào)此范圍)，pH 值低于7.0會降低洗脫效率。DNA產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃，以防DNA降解。
5、DNA濃度及純度檢測：得到的基因組DNA段的大小與病毒的保存條件和種類等因素有關(guān)。D260值為1.0相當(dāng)于大約50 ug/ml雙鏈DNA、40 ug/ml單鏈DNA。OD260/OD280比值應(yīng)為1.7-1.9，如果洗脫時不使用洗脫緩沖液，而使用去離子水，比值會偏低，因為pH值和離子存在會影響光吸收值，但并不表示純度低。6、如果病毒含量過低，后提取的基因組DAN電泳可能無法檢測到，但PCR等其他實(shí)驗還會有結(jié)果。
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