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CTAB如何提取葉片DNA呢?

在生物體中核酸常與蛋白質(zhì)結(jié)合在- - 起,以核蛋白的形式存在。核酸分為脫氧核糖核酸(DNA)和核糖核酸(RNA)兩大類,在真核細(xì)胞中,前者主要存在于細(xì)胞核中,后者主要存在于細(xì)胞質(zhì)及核仁里。在制備核酸時(shí),通過(guò)研磨破壞細(xì)胞壁和細(xì)胞膜,使核蛋白被釋放出來(lái)。在濃氯化鈉溶液(1-2 mol/L)中, DNA核蛋白的溶解度很大,RNA核蛋白的溶解度很小:。而在稀氯化鈉溶液(0.14mol/L)中,DNA核蛋白的溶解度很小,RNA 核蛋白的溶解度很大。因此,可利用不同濃度的氯化鈉溶液將DNA核蛋白和RNA核蛋白從樣品中分別抽提出來(lái)。
分離得到核蛋白后,需進(jìn)一步將蛋白等雜質(zhì)除去,采用的去除蛋白的方法:用含異戊醇的氯f(wàn)振蕩核蛋白溶液,使其乳化,然后離心除去變性蛋白質(zhì),此時(shí)蛋白質(zhì)凝膠停留在水相和氯f(wàn)相中間,而DNA溶于上層水相。用兩倍體積95%乙醇溶液將DNA鈉鹽沉淀出來(lái)。如果用酸性乙醇或冰乙酸來(lái)沉淀,得到的是游離的DNA.反復(fù)使用上述方法多次處理DNA核蛋白溶液,就能將蛋白等雜質(zhì)較*地除去,得到較純的DNA制品。為了*除去DNA制品中混雜的RNA,可用RNA酶處理。生物材料中含有的脂肪物質(zhì)和大部分的多糖,在用鹽溶液分離核蛋白和用乙醇或異丙醇分級(jí)沉淀時(shí)即被除去。


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